Preklinisk evaluering av adaptive re-dirigert T-celle terapi som en behandling av cancer
Forsøkets Formål og Nytteverdi
Dette prosjektet identifiserer kandidater for T-celle reseptor (TCR) transfer i bruk i adoptiv T celle terapi i behandling av kreftpasienter. Adoptiv cell therapy (ACT) involverer administrering av et stort antall selekterte celler med høy aviditet og spesifisitet for tumor antigen. T-celle reseptorene er klonet fra pasienter som viser eksepsjonelt gode kliniske responser etter behandling med kreftvaksiner. Ved å overføre disse TCR til T-celler fra andre pasienter har vi mulighet til å re dirigere T-cellene mot deres kreft. Potensialet til TCR gen-overføring må demonstreres in vivo før den kan overføres til klinikk og er et krav fra SLV. Effektivitet i tumor ”eradiction” og andre parametere vil bli monitorert og vil være essensiell informasjon for design av fremtidige kliniske studier
Antall dyr og dyreart
Vi inokulerer NOD/SCID mus med en cellelinje som i tilegg til tumorantigenet, utrykker luciferase. Vi har 6 unike TCR skal testes mot 2 forskjellige tumorlinjer. Det er to typer forsøk pr TCR, den ene ser på effekten TCR Tc har på tumorutvikling, gentas opptil 3 ganger. Tidligere erfaringer viser at ved å ha 8 mus i hver gruppe vil resultane være statistisk signinfikante. Det er to grupper som behandles med T celler i hvert forsøk, samt en tumor kontroll gruppe på 4 dyr (20dyr). I det andre forsøket er hensikt å dokumentere at Tc går til tumor, utføres 1 gang pr TCR som testes. Her er det 4 dyr i hver gruppe (12 dyr). Med 6 TCR i pipeline vil vi bruke 960dyr. Dette er iberegnet 2 ekstra dyr i tilfelle manglende etablering av tumor eller at dyrene må avlives/dør av uforutsette hendelser. De 6 TCR skal testes mot to forskjellige tumorlinjer som tilsammen gir 12 forskjellige linjer som skal etableres enten Intraperitonalt eller subkutant. I disse forsøkene trenger vi 3 grupper dyr med 3 dyr i hver gruppe. Som gir tilsammen 9 dyr til hver tumorlinje som testes. Tilsammen trenger vi da 108 dyr. Totalt forbruk av dyr vil da være 1068 dyr.
Skadevirkninger
Behandlingen vil ikke volde dyrene stort ubehag. Tumor inoculeres s.c. eller i.p. ved hjelp av sprøytestikk. Behandlingen med redirigerte Tc vil adminitreres vha sprøytestikk i.p. eller i.v. og eventuelt ubehag varer i sekunder. Tumorvekst monitoreres ukentlig med IVIS som utføres under gass anestesi. Dyrenes generelle helsestatus følges daglig og dyrene vil avlives ved stor tumorload eller ved nedsatt helse i henhold til gitte kriterier.
Etterleve 3 R
3R:
Replacement; Å teste potensiale til den valgte TCR in vivo er et krav fra SLVs side før disse protokollenene kan overføres til klinikken. Reduksjon; Vi bruker et minimalt antall dyr som vil støtte et statistisk signifikant resultat. Vi bruker turmormodell som er modifisert med luciferase reportersytem, som gjør at vi kan føge tumorutvikling på en skånsom måte vha av in-vivo imaging system (IVIS), og dermed en reduksjon i antall dyr i hver gruppe. Refinement; dyrets bur er utstyrt med miljøberikelse som papir til bol bygging (alltid) og veksling mellom papphus, plastrør eller plast-iglo.
Dette prosjektet identifiserer kandidater for T-celle reseptor (TCR) transfer i bruk i adoptiv T celle terapi i behandling av kreftpasienter. Adoptiv cell therapy (ACT) involverer administrering av et stort antall selekterte celler med høy aviditet og spesifisitet for tumor antigen. T-celle reseptorene er klonet fra pasienter som viser eksepsjonelt gode kliniske responser etter behandling med kreftvaksiner. Ved å overføre disse TCR til T-celler fra andre pasienter har vi mulighet til å re dirigere T-cellene mot deres kreft. Potensialet til TCR gen-overføring må demonstreres in vivo før den kan overføres til klinikk og er et krav fra SLV. Effektivitet i tumor ”eradiction” og andre parametere vil bli monitorert og vil være essensiell informasjon for design av fremtidige kliniske studier
Antall dyr og dyreart
Vi inokulerer NOD/SCID mus med en cellelinje som i tilegg til tumorantigenet, utrykker luciferase. Vi har 6 unike TCR skal testes mot 2 forskjellige tumorlinjer. Det er to typer forsøk pr TCR, den ene ser på effekten TCR Tc har på tumorutvikling, gentas opptil 3 ganger. Tidligere erfaringer viser at ved å ha 8 mus i hver gruppe vil resultane være statistisk signinfikante. Det er to grupper som behandles med T celler i hvert forsøk, samt en tumor kontroll gruppe på 4 dyr (20dyr). I det andre forsøket er hensikt å dokumentere at Tc går til tumor, utføres 1 gang pr TCR som testes. Her er det 4 dyr i hver gruppe (12 dyr). Med 6 TCR i pipeline vil vi bruke 960dyr. Dette er iberegnet 2 ekstra dyr i tilfelle manglende etablering av tumor eller at dyrene må avlives/dør av uforutsette hendelser. De 6 TCR skal testes mot to forskjellige tumorlinjer som tilsammen gir 12 forskjellige linjer som skal etableres enten Intraperitonalt eller subkutant. I disse forsøkene trenger vi 3 grupper dyr med 3 dyr i hver gruppe. Som gir tilsammen 9 dyr til hver tumorlinje som testes. Tilsammen trenger vi da 108 dyr. Totalt forbruk av dyr vil da være 1068 dyr.
Skadevirkninger
Behandlingen vil ikke volde dyrene stort ubehag. Tumor inoculeres s.c. eller i.p. ved hjelp av sprøytestikk. Behandlingen med redirigerte Tc vil adminitreres vha sprøytestikk i.p. eller i.v. og eventuelt ubehag varer i sekunder. Tumorvekst monitoreres ukentlig med IVIS som utføres under gass anestesi. Dyrenes generelle helsestatus følges daglig og dyrene vil avlives ved stor tumorload eller ved nedsatt helse i henhold til gitte kriterier.
Etterleve 3 R
3R:
Replacement; Å teste potensiale til den valgte TCR in vivo er et krav fra SLVs side før disse protokollenene kan overføres til klinikken. Reduksjon; Vi bruker et minimalt antall dyr som vil støtte et statistisk signifikant resultat. Vi bruker turmormodell som er modifisert med luciferase reportersytem, som gjør at vi kan føge tumorutvikling på en skånsom måte vha av in-vivo imaging system (IVIS), og dermed en reduksjon i antall dyr i hver gruppe. Refinement; dyrets bur er utstyrt med miljøberikelse som papir til bol bygging (alltid) og veksling mellom papphus, plastrør eller plast-iglo.